摘要：對(duì)試驗(yàn)小鼠飼喂1‰和3‰抗菌肽飼料添加劑，雞紅細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，研究抗菌肽飼料添加劑對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果：抗菌肽飼料添加劑可以顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，增強(qiáng)小鼠非特異性免疫功能。 關(guān)鍵詞：抗菌肽飼料添加劑;先天性免疫;小鼠 Influence of antimicrobial peptides feed additive on the phagocytic function of macrophage in mice WANG Kai1, LUO Jiedong 1, ZHOU Hongbo2,PI Canhui2,PENG Yonghe2,SU Xiangdong2,LI Yongxin2 (1. Foshan University, foshan, 528000, china; 2. Shenzhen Sunsmile Biotechnology Co., Ltd，Shenzhen，518057，China) Abstract:To evaluate the immune function of microbial peptides feed additive, the tests of innate immune function were carried out. Results: After taking the antimicrobiol peptides feed additive, the phagocytic rate and phagocytic index of chicken red cell devoured by mouse abdominal phagocyte were heightened(P<0.01).Conclusion: antimicrobial peptides feed additive can greatly strengthen the phagocytic function of macrophage in mice , and potent improve the host innate immunity. Key words: microbial peptides feed additive ;innate immunity; mouse 抗菌肽是生物在長期進(jìn)化過程中為適應(yīng)環(huán)境、求得生存而最早產(chǎn)生的免疫活性分子，是天然免疫的重要介質(zhì)，在宿主對(duì)抗病原入侵的免疫防御中起著極其重要的作用，被形象地稱為“天然抗菌劑”，也稱“陽離子宿主防御肽”[1]?？咕脑隗w內(nèi)除了能以直接殺死病原菌的方式起作用外，更多的時(shí)候是作為免疫效應(yīng)分子來啟動(dòng)、調(diào)節(jié)宿主免疫防御體系：如充當(dāng)單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的趨化因子，使它們能快速聚集在炎癥反應(yīng)部位;促進(jìn)化學(xué)因子的表達(dá)和T輔助淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng);抑制細(xì)菌產(chǎn)物(如脂多糖、脂壁酸)誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)宿主有害的細(xì)胞因子，避免內(nèi)毒素血癥的發(fā)生;促使巨噬細(xì)胞及激活的淋巴細(xì)胞的凋亡，也就是指具有潛在消滅感染細(xì)胞的功能等[2]。 本研究旨在通過研究抗菌肽飼料添加劑對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響以探索其對(duì)動(dòng)物非特異性免疫功能的影響，為今后進(jìn)一步推廣使用抗菌肽，取代傳統(tǒng)抗生素產(chǎn)品提供理論依據(jù)。 1材料和方法 1.1 試驗(yàn)材料 抗菌肽飼料添加劑由深圳圣西馬生物技術(shù)有限公司提供，商品名稱為肽輕松。 1.2試驗(yàn)動(dòng)物分組 6～8周齡健康小鼠60只，雌雄兼用，體重18～22g，隨機(jī)分為三組，每組20只(一組對(duì)照，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組)分籠飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。對(duì)照組飼喂全價(jià)營養(yǎng)飼料，實(shí)驗(yàn)組1飼喂全價(jià)營養(yǎng)飼料+1%抗菌肽飼料添加劑;實(shí)驗(yàn)組2飼喂全價(jià)營養(yǎng)飼料+3%抗菌肽飼料添加劑。 1.3非特異性免疫功能檢測(cè)：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能試驗(yàn)(半體內(nèi)法) 飼喂第20天，每只小白鼠腹腔注射加熱至澄清的6%淀粉溶液1ml。24小時(shí)后，再次注射1ml淀粉溶液。間隔2h，每鼠腹腔注射1%的雞紅細(xì)胞懸液1ml。間隔2h，頸椎脫臼處死，仰位固定于平板上。剖開腹腔，抽取腹腔液滴片，制作臨時(shí)裝片，瑞氏染液染色。油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)和吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)[3]。 吞噬百分率(%)=100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞×100%; 吞噬指數(shù)=100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞。 1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用單因素方差分析，SPSS 11.5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 2.試驗(yàn)結(jié)果 抗菌肽對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。由表1中可見，兩個(gè)劑量組與對(duì)照組比較，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均有增高，且差異極顯著(P<0.01)。兩個(gè)劑量組相比較，隨著飼喂劑量的提高，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)都相應(yīng)提高。 表1抗菌肽對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 effects of Antimicrobial peptides feed additive on phagocytosis of macrophage in mouse
表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD);Dates in the table indicated by Mean±SD.* P<0.05，** P<0.01 3.討論 3.1抗菌肽飼料添加劑可提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力 巨噬細(xì)胞主要參與動(dòng)物機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng)，可以通過吞噬作用殺傷病原微生物和腫瘤細(xì)胞，還可釋放一些細(xì)胞因子和效應(yīng)分子來發(fā)揮多種生物學(xué)作用，是機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)和機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素。大多數(shù)抗原經(jīng)巨噬細(xì)胞處理后，免疫原性會(huì)大大增強(qiáng)，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答[4]。通過測(cè)定巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)可以反映其吞噬功能的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗菌肽飼料添加劑能增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力，且吞噬能力隨飼喂劑量的增加而提高。因此，抗菌肽飼料添加制劑具有增強(qiáng)小鼠非特異性免疫功能。這與已發(fā)表的報(bào)道結(jié)果一致：溫劉發(fā)[5]等在2001通過試驗(yàn)證實(shí)抗菌肽飼料可以減輕斷奶仔豬的腹瀉，皮燦輝[6]等于2008年對(duì)母豬飼喂抗菌肽飼料添加劑，通過試劑盒檢測(cè)瘟抗體水平，發(fā)現(xiàn)飼喂抗菌肽飼料添加劑的母豬其體內(nèi)豬瘟抗體水平得到了有效的提高。 3.2抗菌肽作為抗生素替代物的市場(chǎng)應(yīng)用前景 抗菌肽具有高效性(其半數(shù)致死濃度平均在幾十微摩爾以內(nèi))、抗菌譜廣、可供選擇的范圍廣、靶菌株不易產(chǎn)生抗性突變等，從而避免了傳統(tǒng)抗生素類藥物對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的損害?？咕淖鳛樾笄蒿暳咸砑觿┤〈虿糠秩〈壳帮曃箘?dòng)物所用的抗生素，減少抗生素對(duì)動(dòng)物體的危害，已經(jīng)顯示出了較好的應(yīng)用前景： 溫劉發(fā)[7]等證實(shí)，將開發(fā)的抗菌肽飼料添加于斷奶仔豬飼料中，可以減輕斷奶仔豬的腹瀉;陳曉生等人[8]在肉鴨飼料中添加液體的蠶抗菌肽A D-酵母制劑后，發(fā)現(xiàn)鴨的血清代謝激素活動(dòng)和營養(yǎng)物質(zhì)合成顯著增強(qiáng);黃永彤等[7]將抗菌肽應(yīng)用于飼喂肉雞，發(fā)現(xiàn)有促進(jìn)生長和提高免疫力作用，且與中草藥和抗生素組對(duì)比，均無顯著性差異;王廣軍等[9]在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖中研究抗菌肽的應(yīng)用效果，證實(shí)在飼料中添加抗菌肽后在日生長速度、相對(duì)增重率、飼料系數(shù)、成活率和抗病力方面均有顯著提高。 隨著抗菌肽應(yīng)用領(lǐng)域的不斷拓展及其作用機(jī)理研究的不斷深入發(fā)展，抗菌肽與人類生活的關(guān)系也將越來越密切，抗菌肽的市場(chǎng)開發(fā)和應(yīng)用前景必將更為廣闊。 ?。ㄗ髡撸菏ノ黢R 來源：圣西馬） |
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