畜牧人

標(biāo)題: 有關(guān)大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵 [打印本頁(yè)]
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-12 09:54
標(biāo)題: 有關(guān)大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵
有誰(shuí)有大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵的資料的

轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，通過(guò)基因工程手段，設(shè)計(jì)一段核苷酸序列移植入大腸桿菌，用于生產(chǎn)所需的目的蛋白 。想了解下有誰(shuí)做過(guò)這方面研究的，能不能分享下。

或者發(fā)到我郵箱：mondl@163.com

謝謝了

[ts]mondl 于 2009-9-12 09:55 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

希望知道的朋友幫下忙，或者開(kāi)貼出售，不過(guò)窮人，不要太貴:haoa:
作者: 孤世才子    時(shí)間: 2009-9-12 10:09
期待高手回答，，，，，，，，，，
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-14 09:41
目的產(chǎn)品用于飼料方面，不是醫(yī)藥、食品，相對(duì)要求要松點(diǎn)，望達(dá)人不吝賜教
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-18 10:58
我們實(shí)驗(yàn)室的課題啊。（微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家糖工程技術(shù)研究中心）在國(guó)內(nèi)差不多是專(zhuān)長(zhǎng)。

你說(shuō)那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化啊？
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-19 08:16
發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化吧

菌種是別人提供的，沒(méi)接觸過(guò)這個(gè)，要寫(xiě)相關(guān)內(nèi)容不知道如何入手。。。。

提供者是實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，說(shuō)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差比較大，他對(duì)工業(yè)發(fā)酵也不了解
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-19 15:26
引用自葉赫娜蘭-孤城 發(fā)表于 2009-9-18 10:58的內(nèi)容
我們實(shí)驗(yàn)室的課題啊。（微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家糖工程技術(shù)研究中心）在國(guó)內(nèi)差不多是專(zhuān)長(zhǎng)。

你說(shuō)那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化??？


現(xiàn)在的轉(zhuǎn)基因菌種是人為移植一段編寫(xiě)的核苷酸序列段，設(shè)計(jì)核苷酸序列在菌體中表現(xiàn)為蛋白質(zhì)（目標(biāo)小肽不斷重復(fù)），在體內(nèi)蛋白酶酶解為目標(biāo)小肽.
不知道這個(gè)發(fā)酵過(guò)程怎么控制的好

煩李博士幫幫忙了
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-21 08:48
1,菌株構(gòu)建好沒(méi)有，目前表達(dá)量多少？可以進(jìn)入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導(dǎo)機(jī)制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達(dá)更合理些。
5，這個(gè)短肽是什么？

望認(rèn)真回答一下，我看能幫您些什么。
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-21 09:32
引用自葉赫娜蘭-孤城 發(fā)表于 2009-9-21 08:48的內(nèi)容
1,菌株構(gòu)建好沒(méi)有，目前表達(dá)量多少？可以進(jìn)入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導(dǎo)機(jī)制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達(dá)更合理些。
5，這個(gè)短肽是什么？


1. 菌株構(gòu)建好了的，目前實(shí)驗(yàn)室表達(dá)量是12g/L。目的蛋白占總蛋白的40%左右。
2. 實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵菌株穩(wěn)定性達(dá)到要求，Gn多聚體核苷酸序列是克隆到pET2a質(zhì)粒上的。
3. 這個(gè)不懂。。。。。原文寫(xiě)下來(lái)吧：將pR-12Gn多聚體核苷酸序列克隆到pET32a質(zhì)粒上，獲得原核表達(dá)載體pET-12Gn，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)陽(yáng)性克隆檢測(cè)并測(cè)序證明序列正確后，在IPTG誘導(dǎo)下進(jìn)行蛋白表達(dá)。
4. 這個(gè)我也不是很清楚，是別人實(shí)驗(yàn)室提供的數(shù)據(jù)。。。。他們貌似選過(guò)不少菌種，最后選擇大腸桿菌做母體。（根據(jù)大腸桿菌偏愛(ài)合成含特異胰蛋白酶和胃蛋白酶酶切點(diǎn)的Gly-Gln二肽核苷酸序列Gn，并克隆至pRSET A質(zhì)粒中，采用串聯(lián)重復(fù)策略獲得pR-12Gn重組質(zhì)粒。）
5. 這個(gè)短肽是Gly-Gln二肽，不是直接表達(dá)，在菌體獲取聚合蛋白，經(jīng)酶切后獲取小肽。
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-21 10:08
這個(gè)水平（12G）可以轉(zhuǎn)入發(fā)酵了。想做到什么水平呢？

是發(fā)文章的水平還是工業(yè)水平。如是前者，要有代謝流分析和比較時(shí)髦點(diǎn)的算法----也就是先做試驗(yàn)，自己做出明確目標(biāo)后，把算法湊上----就行了。
如是后者，則要傳統(tǒng)分析結(jié)合代謝流分析，選擇工藝路線等等一步一步往下走。

不管怎樣，要做N批發(fā)酵，必須要有比較先進(jìn)的發(fā)酵罐。
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-21 10:17
這個(gè)按照你的經(jīng)驗(yàn)，理論上用什么類(lèi)型的發(fā)酵罐跟按照什么樣的發(fā)酵流程比較合理？

主要作用是在于寫(xiě)文章，但是沒(méi)接觸過(guò)工業(yè)發(fā)酵，對(duì)這方面一竅不通。。。實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差也比較大，可比性不高。。。。
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-21 10:22
這個(gè)按照正常要進(jìn)行N批發(fā)酵是知道的，畢竟每個(gè)地方，每個(gè)發(fā)酵罐的構(gòu)成會(huì)有一定的差異，各地底物之類(lèi)有一定差異。

若誘導(dǎo)條件在溫度30℃，Amp濃度為50μg/mL，0.1mMIPTG過(guò)夜誘導(dǎo)的情況下會(huì)怎樣，你看看理論上的數(shù)據(jù)能達(dá)到什么程度，有什么建議的？

謝謝了
作者: gaoyuyun    時(shí)間: 2009-9-21 12:40
工業(yè)生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室是不一樣的，一定要注意
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-21 14:13
就是因?yàn)椴灰粯?，所以才要找資料。。。。

樓上太油菜了，論壇幣911:5s:
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-21 18:36
12# mondl 你說(shuō)的是常規(guī)條件啊。

普通實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐就可以，要有在線參數(shù)：PH，DO，溫度，并可控。離線檢測(cè)葡萄糖，氨基氮，溶磷。

一般的，就可以進(jìn)行一些時(shí)髦的計(jì)算了，比如，引入差商，引入擬合法，響應(yīng)面就可以了，可以做得很漂亮。

要不要代謝流分析呢？如要，還要加尾氣分析儀，稱(chēng)重設(shè)備。
作者: zhenjieli    時(shí)間: 2009-9-21 20:51
不是太懂，感覺(jué)應(yīng)該是很有前途的。
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-22 08:39
我也不懂，越看多了就越覺(jué)得深?yuàn)W了:5s:

給孤城兄說(shuō)的有點(diǎn)：如入人間仙境了，:tiaotiao:


不是說(shuō)孤城兄說(shuō)的不好，是說(shuō)的很到位，只不過(guò)我說(shuō)真的沒(méi)涉及過(guò)這方面的，還真不知道個(gè)中道理:hehes:
作者: mondl    時(shí)間: 2009-9-22 08:55
15# 葉赫娜蘭-孤城



不過(guò)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐跟工業(yè)發(fā)酵罐規(guī)格上差很遠(yuǎn)吧，這樣其他可控條件之類(lèi)的都變化很大吧，況且實(shí)驗(yàn)室的底物之類(lèi)一般都跟工業(yè)怎樣的有點(diǎn)的差別吧，工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺(jué)沒(méi)沒(méi)可能像實(shí)驗(yàn)室那樣控制的那么好，再怎樣嚴(yán)格，在中國(guó)這個(gè)地方還是會(huì)出現(xiàn)些不可控的因素



這樣感覺(jué)綜合起來(lái)總體條件應(yīng)該也差的比較多了





不過(guò)怎樣也好，都是謝謝孤城兄的熱心解答了，幫了不少忙
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-22 09:24
暈，我還沒(méi)展開(kāi)講呢。還沒(méi)進(jìn)入正題啊。
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-22 09:36
引用自mondl 發(fā)表于 2009-9-22 08:55的內(nèi)容
15# 葉赫娜蘭-孤城  



不過(guò)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐跟工業(yè)發(fā)酵罐規(guī)格上差很遠(yuǎn)吧，這樣其他可控條件之類(lèi)的都變化很大吧，況且實(shí)驗(yàn)室的底物之類(lèi)一般都跟工業(yè)怎樣的有點(diǎn)的差別吧，工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺(jué)沒(méi)沒(méi)可能像實(shí)驗(yàn)
工業(yè)發(fā)酵看產(chǎn)品，一般50噸到300噸常見(jiàn)。但藥品有100升的，總體講，在相同參數(shù)下，工業(yè)比實(shí)驗(yàn)室要嚴(yán)格得多。造價(jià)也貴的多。

你的實(shí)驗(yàn)，用30升最適合，再小一點(diǎn)，攪拌性能就差得太多。參數(shù)會(huì)出現(xiàn)噪音干擾性顫抖，而30升，可以對(duì)參數(shù)的背景噪音的干擾，做最大程度的忽略，數(shù)據(jù)還能湊著看----當(dāng)然，越大越好，不過(guò)，實(shí)驗(yàn)室水平的小試就不接受了。50升左右或以上也行，有可能要修改下水系統(tǒng)，購(gòu)置時(shí)要小心。
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-22 09:42
“況且實(shí)驗(yàn)室的底物之類(lèi)一般都跟工業(yè)怎樣的有點(diǎn)的差別吧”

在解釋這一點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)室底物和工業(yè)上講，如果說(shuō)差別，不如說(shuō)是配方思路造成的差別，并不存在底物選擇上的差別----都有很廣的選擇性。當(dāng)然，選擇標(biāo)準(zhǔn)是有差異的，一句配方思路的差異，實(shí)驗(yàn)室水平要求底物是“單一組分，純（擔(dān)不是高純度，就是單一的意思）”。工業(yè)水平要求就多一個(gè)，是兩個(gè)：1，穩(wěn)定，明確（但不要求一定“單一”），2，質(zhì)量要“好”。

總體說(shuō)來(lái)，工業(yè)要求水平更高些。
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-22 09:45
“工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺(jué)沒(méi)沒(méi)可能像實(shí)驗(yàn)室那樣控制的那么好，再怎樣嚴(yán)格，在中國(guó)這個(gè)地方還是會(huì)出現(xiàn)些不可控的因素”

呵呵，正好相反啊。任何時(shí)候，工業(yè)自身的特點(diǎn)決定了嚴(yán)格是大大高于實(shí)驗(yàn)室的。在典型的發(fā)酵行業(yè)內(nèi)，任何一個(gè)成熟的車(chē)間，嚴(yán)格程度，高于任何一個(gè)國(guó)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室。（失敗的車(chē)間除外）
作者: 葉赫娜蘭.孤城    時(shí)間: 2009-9-22 09:48
補(bǔ)充一點(diǎn)，事故不能說(shuō)明不嚴(yán)格，是規(guī)模和復(fù)雜帶來(lái)的，可以減少，不可避免的----與幾率有關(guān)----當(dāng)然，車(chē)間會(huì)認(rèn)為事故時(shí)可以避免的，可以降到概率為零，這不是錯(cuò)的。但是，概率為零的事物，不是不會(huì)發(fā)生的事物。



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