畜牧人
標(biāo)題: 大家好,我是新手,請多多指教 [打印本頁]
作者: zkjysw 時間: 2011-6-14 15:58
標(biāo)題: 大家好,我是新手,請多多指教
發(fā)酵飼料檢測標(biāo)準(zhǔn)
1.水分、粗蛋白、灰分分析方法全部采用國標(biāo)法。
1)水分的測定
GB6435-86
試樣在105±2℃烘箱內(nèi),在大氣壓下烘干,直至恒重,逸失的重量為水分。
2)粗蛋白的測定
GB/T 6432—94
凱氏定氮法:凱氏法測定試樣中的含氮量,即在催化劑作用下,用硫酸破壞有機(jī)物,使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,測出氮含量,將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25,計算出粗蛋白含量。
3)粗灰分的測定
GB/T 6438-92
試料在550℃灼燒后所得殘渣,用質(zhì)量百分率來表示。殘渣中主要是氧化物、鹽類等礦物質(zhì),也包括混入飼料中的砂石、土等,故稱粗灰分。
2. pH的測定
稱取樣品10g與50ml的燒杯中,移取10ml去離子水,攪拌30min,用 pHS-3C型pH計測定溶液的pH值,或者用精密pH試紙測試。
3.菌落總數(shù)測定
菌落總數(shù)就是指在一定條件下(如需氧情況、營養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細(xì)菌菌落總數(shù)。按國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定,即在需氧情況下,37℃培養(yǎng)48h,能在普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長的細(xì)菌菌落總數(shù),所以厭氧或微需氧菌、有特殊營養(yǎng)要求的以及非嗜中溫的細(xì)菌,由于現(xiàn)有條件不能滿足其生理需求,故難以繁殖生長。因此菌落總數(shù)并不表示實際中的所有細(xì)菌總數(shù),菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類。
操作方法:
1)以無菌操作取檢樣10g,放于90mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠),經(jīng)充分振要或研磨制成1:10的均勻稀釋液。
固體檢樣在加入稀釋液后,最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min的速度處理1min,制成1:10的均勻稀釋液。
用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混合均勻,制成1:100的稀釋液。
另取1ml滅菌吸管,按上項操作順序,制10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。
2)傾注培養(yǎng)
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計,選擇2~3個適宜稀釋度,分別在制10倍遞增稀釋的同時,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中,每個稀釋度做兩個平皿。
將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,并轉(zhuǎn)動平皿,混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。
待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h,取出計算平板內(nèi)菌落數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數(shù)。
說明:傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內(nèi)保溫,溫度過高會影響細(xì)菌生長,過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴,應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜。培養(yǎng)溫度一般為37℃。培養(yǎng)時間一般為72h。
3)計數(shù)和報告
培養(yǎng)到時間后,計數(shù)每個平板上的菌落數(shù)。可用肉眼觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù),計算處原始樣品中每克(或每ml)中的菌落數(shù),進(jìn)行報告。
說明:計數(shù)時應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板(SN標(biāo)準(zhǔn)要求為25~250個菌落),若有二個稀釋度均在30~300之間時,按國家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定,比值小于或等于2取平均數(shù),比值大于2則其較小數(shù)字(有的規(guī)定不考慮其比值大小,均以平均數(shù)報告);若所有稀釋度均不在計數(shù)區(qū)間。如均大于300,則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如均小于30,則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告之。如菌落數(shù)有的大于300,有的又小于30,但均不在30~300之間,則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如所有稀釋度均無菌落生長,則應(yīng)按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。有的規(guī)定對上述幾種情況計算出的菌落數(shù)按估算值報告;不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比(同一稀釋度的二個平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近),即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少,稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多;當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長時,如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限,則應(yīng)作為一個菌落計,如存在有幾條不同來源的鏈,則每條鏈均應(yīng)按一個菌落計算,不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。如有片狀菌落生長,該平板一般不宜采用,如片狀菌落不到平板一半,而另一半又分布均勻,則可以半個平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù);當(dāng)計數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多(即所有稀釋度均大于300時),但分布很均勻,可取平板的一半或1/4計數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。
由于發(fā)酵飼料中有芽孢桿菌,乳桿菌,酵母菌等多種菌,故檢測應(yīng)取其總數(shù),酵母和芽孢生長速度較快,乳桿菌為兼性厭氧菌,生長速度較慢,應(yīng)將平板培養(yǎng)3-5天檢測菌數(shù),結(jié)果較為接近真實。
4.雜菌測定
發(fā)酵料目測應(yīng)無污染(白毛-毛霉或根霉,綠毛-青霉),平板培養(yǎng)(方法同上)霉菌總數(shù)<1000個/克。
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