飼料用抗氧化單制劑及飼料中抗氧化劑的檢驗(yàn)

007畜牧

　

　(一)飼料用乙氧基喹啉的檢驗(yàn)
　　1．中國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)法
　　此法適用于以對(duì)氨基苯乙醚和丙酮為主要原料合成的乙氧基喹啉(ethoxyquinline)。在飼料工業(yè)中，用作抗氧化添加劑。化學(xué)名稱6-乙氧基-1，2-二氫-2，2，4-三甲基喹啉(6-ethoxy-1，2-dihydro-2，2，4-trimethyl
　　quinoline)，簡(jiǎn)稱乙氧喹、乙氧基喹等。
　　(1)鑒別：黃褐色或褐色黏稠液體，稍有特殊氣味。易溶于丙酮、異丙醇、乙醚、三氯甲烷、石油醚及正己烷，幾乎不溶于水。遇空氣或光顏色逐漸變深，但不影響使用效果。
　　(2)測(cè)定
　　①樣液制備：稱取試樣約0.2g(精確至0.000 2g)于干燥具塞的三角瓶中，加30ml冰乙酸，使之溶解，另加lml乙酸酐。
　?、诘味ǎ杭?滴結(jié)晶紫指示液，用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(0.1mol／L)滴定至綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。
　?、鄯治鼋Y(jié)果計(jì)算：乙氧基喹啉含量以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示，由下式給出：
　　X2=((V1-V2)×c×0.2173×100％)/m3
　　式中：V1--試樣消耗高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積(m1)；
　　v2--空白試驗(yàn)消耗高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(m1)；
　　c--高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度(mol／L)；
　　m3--樣品的質(zhì)量(g)；
　　0.217 3--與lml高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HClO4)=0.100 0mol／L]相當(dāng)?shù)腃14H19NO
　　的質(zhì)量(g)。
　　所得結(jié)果應(yīng)表示至1位小數(shù)(參見(jiàn)中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY 0039-1991)。
　　2．美國(guó)飼料原料協(xié)會(huì)法
　　(1)原理：用石油醚將飼料樣品中的乙氧喹及熒光法測(cè)定的物質(zhì)提取，過(guò)濾；然后通過(guò)氧化鋁柱層分離，洗脫乙氧喹，用熒光法測(cè)定。
　　(2)測(cè)定
　?、僖译妫簾晒庾x數(shù)小于2，如大于2則需重蒸餾。
　?、谝已踵瓨?biāo)準(zhǔn)系列(1h內(nèi)新配)：配制0.5μg／ml、1μg／ml、2.5μg／ml的乙氧喹乙腈溶液。
　?、蹮晒鈨x：預(yù)熱1.5h，用2μg ／ml硫酸喹寧校正儀器。
　?、苡靡译鎸x器調(diào)零。
　?、轂V光片：透過(guò)410～580nm。
　　(3)注意事項(xiàng)：含有乙氧喹的洗脫液，不宜使用太多；在旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器上蒸干溶劑；避光操作。
　　(二)丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲酚(BHT)的鑒別
　　1．BHA的鑒別
　　在試樣的乙醇溶液中加2m112％四硼酸鈉溶液及2，6-二氯醌亞胺結(jié)晶數(shù)粒，應(yīng)出現(xiàn)藍(lán)色。取0.5％試樣乙醇(50％)溶液5ml，加2ml三氯化鐵溶液和2ml二
　　2，2-聯(lián)吡啶溶液，應(yīng)出現(xiàn)紅色。
　　2．BHT的鑒別
　　取5ml試樣，加入2.5ml乙醇，溶解后加入25ml水稀釋，混勻，加2ml鄰聯(lián)二茴香胺溶液，搖勻加入0.8ml亞硝酸鈉溶液混合，放置5min，加入0.5ml三氯甲烷，劇烈振搖半分鐘放置分層，三氯甲烷層應(yīng)呈品紅色或紅色。
　　(三)飼料中丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲酚(BHT)和乙氧喹(EQ)的測(cè)定
　　1．原理 樣品中BHA、BHT、EQ用正己烷提取，離心分離后(必要時(shí)凈化處理)，取上清液在氣相色譜儀、FID定量測(cè)定。
　　2．測(cè)定
　　(1)提?。悍Q取2g試樣于l0ml刻度試管中，加入少許無(wú)水硫酸鈉，加入5.0ml正己烷，加塞，在微型混合器上混合0.5min，在超聲波處理槽內(nèi)超聲提取15min。以4000rpm離心2min，上清液為待測(cè)溶液。
　　(2)凈化：如遇干擾待測(cè)組分的樣品，需作氟羅里硅土柱凈化處理，待測(cè)。
　　(3)分別取系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液，在氣相色譜儀進(jìn)行定量測(cè)定BHA、BHT、EQ(參見(jiàn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T17814-1999)。
　　(四)出口魚(yú)粉中乙氧基喹含量的測(cè)定
　　1．原理 樣品用甲醇和石油醚提取后，用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光強(qiáng)度，與標(biāo)準(zhǔn)比較
　　定量。本方法適用于出口魚(yú)粉中乙氧基喹(ethoxyquin)的測(cè)定。
　　2．測(cè)定
　　(1)乙氧基喹標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取l00mg乙氧摹喹于燒杯中，然后移入100ml容量瓶中，用石油醚溶解后并稀釋至l00ml，此液每毫升相當(dāng)lmg乙氧基喹。使用時(shí)，用石油醚制備成每毫升相當(dāng)于0.5mg、lmg、1.5mg、2mg、2.5mg的乙氧基喹標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。
　　(2)硫酸奎寧參比溶液：稱取0.1g分析純硫酸喹寧于1000ml
　　0.5mol／L的硫酸溶液中，吸取10ml此溶液，用0.05mol／L硫酸溶液稀釋至1000ml，此溶液每毫升相當(dāng)于lμg硫酸奎寧，作校正熒光計(jì)用。
　　(3)樣品處理：稱取10g樣品于三角燒瓶中，加入50ml甲醇，搖動(dòng)15min后，將樣液過(guò)濾于250m1分液漏斗中，再用30ml甲醇，分2次洗滌三角瓶，濾液合并于分液漏斗中，加入100ml水，搖勻后，加人50ml石油醚，振搖lmin，靜置分層。若發(fā)現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可加入少量氯化鈉，以使乳化消失。將下層水溶液移人另一個(gè)250m1分液漏斗中，再用石油醚提取2次，每次加入25ml石油醚，合并石油醚提取液，加入50ml水洗滌石油醚，將石油醚通過(guò)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾于100ml容量瓶中，并稀釋至刻度，作樣品測(cè)定液。
　　(4)步驟：將樣品測(cè)定液、試劑空白液以及每毫升相當(dāng)于0μg、0.5μg、1μg、1.5μg、2μg、2.5μg的乙氧基喹標(biāo)準(zhǔn)系列，移入熒光分光光度計(jì)的石英杯中。以狹縫為9mm、365nm為激發(fā)光波長(zhǎng)，以420～450nm波長(zhǎng)進(jìn)行熒光掃描。測(cè)定前用石油醚調(diào)節(jié)熒光分光計(jì)零點(diǎn)，再用硫酸奎寧液調(diào)節(jié)為100，然后進(jìn)行樣品液試劑空白和標(biāo)準(zhǔn)液的測(cè)定，所得熒光強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)乙氧基喹的熒光強(qiáng)度系列繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，求出樣品中乙氧基喹的含量(參見(jiàn)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)lNY／T 46002-1987)。


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