六種中草藥對(duì)幾種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌試驗(yàn)

貔貅

六種中草藥對(duì)幾種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌試驗(yàn) 葉襯弟指導(dǎo)教師：張繼東 （湛江海洋大學(xué)動(dòng)物科學(xué)系廣東湛江 524088）

摘要：本試驗(yàn)用瓊脂擴(kuò)散法和試管稀釋法測(cè)定了大飛揚(yáng)草(Euphorbia hirta L.)、雞骨草(Abrus fruticulosus Wall.)、雞屎藤(Paederia scandens Merr.) 、鬼針草(Bidens bipinnata L.)、醡漿草(Oxalis corniculata L.)和黃連(Coptis chinensis Franch)等六種中草藥對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌K88、大腸桿菌26、大腸桿菌40四種病原菌的體外抑菌作用。試驗(yàn)表明，四種病原菌對(duì)醡漿草均呈高度敏感,MIC為10U/ml;四種細(xì)菌對(duì)黃連均呈中度敏感，其中沙門氏菌的MIC為2.5U/ml，其余三種細(xì)菌的MIC均為5U/ml。沙門氏菌對(duì)雞骨草呈中度敏感,而其MIC大于10U/ml.其余三種中草藥未見(jiàn)抑菌作用。 關(guān)鍵詞：中草藥體外抑菌試驗(yàn)最小抑菌濃度 畜禽疾病的治療是備受關(guān)注的問(wèn)題，廣大獸醫(yī)工作者經(jīng)過(guò)多年的研究實(shí)踐，已取得了一些令人可喜的成果，但由于抗生素等藥物的濫用，致使病原的抗藥性增強(qiáng)，造成高藥物殘留等問(wèn)題，這一直是困擾獸醫(yī)工作者的難題。而中草藥為天然藥物，毒性低，副作用小，可以避免像使用西藥一樣帶來(lái)的某些不足【1】。篩選對(duì)病原微生物敏感，抑菌強(qiáng)度大，特異性高，對(duì)環(huán)境穩(wěn)定的中草藥來(lái)防治畜禽疾病，是發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)的一個(gè)重要課題。本試驗(yàn)旨在篩選出當(dāng)?shù)貙?duì)常見(jiàn)病原菌敏感的中草藥，為臨床防治畜禽疾病，降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效益提供資料。 1．試驗(yàn)材料 1．1 藥物 大飛揚(yáng)草、雞骨草、雞屎藤、鬼針草、醡漿草5種新鮮草藥各500克，黃連（買自某中藥店）10克。 1．2 菌種 沙門氏菌、大腸桿菌1、大腸桿菌2、大腸桿菌K88（由微生物實(shí)驗(yàn)室提供）。 1．3 培養(yǎng)基 (1) 營(yíng)養(yǎng)瓊脂按常規(guī)方法制備營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml）。 (2) 營(yíng)養(yǎng)肉湯按常規(guī)方法制備（牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml）。 1．4 試驗(yàn)設(shè)備 (1)主要儀器 人工臺(tái)式離心機(jī)、高壓蒸汽滅菌器、冰箱、培養(yǎng)箱、無(wú)菌工作臺(tái)。 (2) 其他設(shè)備 研缽、天平、電爐、平皿、試管、三角燒瓶、燒杯、酒精燈、移液管、膠頭滴管、接種環(huán)、游標(biāo)卡尺。 2．試驗(yàn)方法 2．1 菌種的培養(yǎng) 將菌種接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)18h，備用。 2．2 藥液的制備 取待試新鮮草藥各適量，分別用研缽研磨成糊狀，離心沉淀，各取上清液5ml，滅菌備用。黃連10克置于燒杯中，加5～7倍量的水浸泡1小時(shí)，煮沸30min，過(guò)濾，濃縮至每毫升含1g生藥，滅菌備用。 2．3 藥物敏感性測(cè)定 本試驗(yàn)采用瓊脂擴(kuò)散法和試管稀釋法用相同的中草藥對(duì)相同的菌種進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，比較各種中草藥的抑菌效果。 (1) 瓊脂擴(kuò)散法 用滅菌棉簽蘸取供試菌液，均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，然后用直徑6mm的瓊脂打孔器均勻打孔，每板6孔，去除孔內(nèi)瓊脂并適當(dāng)封閉孔底。將供試藥液加于孔中，以滿而不溢為宜并作好標(biāo)記。置4℃冰箱中作用1小時(shí)后取出并置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑小于10mm為耐藥，10～15mm為中度敏感，大于15mm為高度敏感。 (2) 試管稀釋法 取無(wú)菌試管10支，第1管加入1.8ml營(yíng)養(yǎng)肉湯，2～10管加入1ml營(yíng)養(yǎng)肉湯。以無(wú)菌操作吸取已制備好的供試藥液0.2ml加入第一管中，混勻后吸取1ml加入第2管中，依次倍比稀釋至第9管棄去1ml，第10管不加藥液為對(duì)照管（詳見(jiàn)表1）。 表1試管稀釋法操作方法 試管號(hào)12345678910 培養(yǎng)基（ml）1.81.01.01.01.01.01.01.01.01.0 藥液（ml）0.21.01.01.01.01.01.01.01.01.0 （棄去） 試驗(yàn)菌液（ml）0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05 藥液濃度（U/ml）10 52.51.250.630.310.160.080.040 37℃培養(yǎng)18～20h后觀察結(jié)果，能夠完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最小藥物濃度為最小抑菌濃度（MIC）。 3．試驗(yàn)結(jié)果 （1）由瓊脂擴(kuò)散法實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，四種病原菌對(duì)醡漿草均呈高度敏感,對(duì)黃連均呈中度敏感，沙門氏菌對(duì)雞骨草呈中度敏感,其余三種中草藥未見(jiàn)抑菌作用（詳見(jiàn)表2）。 表2中草藥對(duì)細(xì)菌的抑菌情況 沙門氏菌 大腸桿菌1 大腸桿菌2 大腸桿菌K88 大飛揚(yáng)草 8 0 0 0 雞骨草 10 0 8 8 雞屎藤 8 0 0 0 鬼針草 8 0 0 0 醡漿草 17 15 15 16 黃連 13 12 12 12 （2）在試管稀釋實(shí)驗(yàn)中測(cè)得醡漿草對(duì)幾種細(xì)菌的MIC均為10U/ml; 黃連對(duì)沙門氏菌的MIC為2.5U/ml，對(duì)其余三種細(xì)菌的MIC均為5U/ml。雞骨草對(duì)沙門氏菌的抗菌作用不明顯，MIC大于10U/ml（詳見(jiàn)表3）。 表3中草藥的最小抑菌濃度 沙門氏菌 大腸桿菌26 大腸桿菌40 大腸桿菌K88 大飛揚(yáng)草 － － － － 雞骨草 >10 － － － 雞屎藤 － － － － 鬼針草 － － － － 醡漿草 10 10 10 10 黃連 2．5 5 5 5 4．討論與小結(jié) 4.1本試驗(yàn)用瓊脂擴(kuò)散法對(duì)所試中草藥的抑菌作用作了定性檢定，然后用試管稀釋法對(duì)其藥理活性進(jìn)行定量分析，六種中草藥用瓊脂擴(kuò)散法和試管稀釋法得到的結(jié)果相符。以醡漿草抑菌作用最強(qiáng)，黃連次之，其他四味中草藥效果較差或未見(jiàn)抑菌作用。為臨床防治所試敏感病原菌感染提供了一定的試驗(yàn)依據(jù)。 4.2由試驗(yàn)結(jié)果可知，醡漿草對(duì)四種細(xì)菌的抑菌效果均較明顯，但有報(bào)道，醡漿草對(duì)金色葡萄球菌有抗菌作用，對(duì)大腸桿菌則無(wú)效，與本試驗(yàn)結(jié)果不相不同。 4.3本試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散法中沙門氏菌對(duì)雞骨草為中度敏感，在試管稀釋法中測(cè)得的最小抑菌濃度大于10u/ml，表明其對(duì)沙門氏菌的抑菌效果較差。據(jù)報(bào)道，雞骨草能降低葡萄球菌毒素引起的炎癥反應(yīng)，但對(duì)其他細(xì)菌無(wú)抗菌作用；鬼針草在體外對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌由抑菌作用，但它對(duì)沙門氏菌也不表現(xiàn)抑菌效果。本試驗(yàn)結(jié)果證明，雞屎藤、大飛揚(yáng)草、鬼針草三種中草藥對(duì)所試4種細(xì)菌均無(wú)明顯抑菌作用，并從一個(gè)側(cè)面驗(yàn)證了有人報(bào)道，鬼針草單味無(wú)明顯作用，與海州常山混合使用才有作用的結(jié)果。