板藍根多糖的提取及含量測定

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板藍根多糖的提取及含量測定 李劍榮  余雙祥  劉思伽 （廣東省家禽科學(xué)研究所廣州石井 510430）

摘要目的：從板藍根中提取多糖，并測定其含量。方法：用水提醇沉法提取板藍根多糖，用酚-硫酸比色法測定多糖含量。結(jié)果：測得板藍根中多糖含量0.8099%，平均回收率為98.74%，RSD=1.86（N=5）。結(jié)論：板藍根多糖含量不是很高，提取方法有待進一步改進。 關(guān)健詞：板藍根多糖提取含量測定 Extraction and content determinations of Polysaccharide of Indigowoad Root LI Jian-rong YU Shuang-xiang Liu Si-jia （Guangdong Provincial Poultry Research Center, Shijing, Guangzhou 510430） Abstract:Obiective:The extraction and content determinations polysaccharides of Indigowoad Root. Methods：Polysaccharides of Indigowoad Root were obtained by hotwater extraction and ethanol precipitation,content determinations with phenol-vitriolic colorimetry, Results:The polysacharides content of Indigowoad Root is 0.8099%, recovery rate is 98.74%.Conclusion:The polysaccharides content of Indigowoad Root isn,t higher,The estraction of method must be improved. Key words:indigowoad Root;Polysaccharide;estraction;content determinations     板藍根（Indigowoad root）為十字科植物菘藍的根。菘藍是二年生草本，植株高50～100cm,花期4～5月，果期5～6月。我國許多地區(qū)都有分分，主產(chǎn)于河北安國，江蘇如皋、南通等地，各地亦有栽培。板藍根呈圓柱形，稍扭曲，長10～20cm，直徑0.5～1cm，氣微，味微甜后苦澀。板藍根含靛藍，多種氨基酸，另含有12%氯基酸的蛋白多糖。板藍根有抑菌作用，對實體瘤有一定治療作用。板藍根多糖25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg腹腔注射可明顯增強小鼠對二硝基氯苯的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，誘導(dǎo)體內(nèi)淋巴細胞轉(zhuǎn)化和增強脾細胞的自然殺傷活性，腹腔注射板藍根多糖50mg/kg，可顯著促進小鼠免疫功能，增強抗體形成細胞功能，增加小鼠靜注碳廓清速率。     本實驗對板藍用石油醚、乙醚除去脂溶性雜質(zhì)，用80%乙醇提取除去所含單糖、低聚糖及苷類等干擾性成分后，再用水提醇沉法制得板藍根粗多糖，并采用酚-硫酸比色法對其多糖含量進行測定。 1 儀器、試劑及樣品 UV-2401 PC紫外分光光度計（日本島津），索氏提取器。 葡萄糖（105°C干燥恒重），苯酚（AR），硫酸（AR）。 板藍根：采自本校藥園，秋季挖根，洗凈晾干，破碎后備用。 2 標準曲線的繪制 2.1 標準葡萄糖溶液的配制     精密稱取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，配成濃度為100.8ug/ml標準葡萄糖溶液備用。 2.2 5%苯酚試劑的配制     取苯酚100g，加鋁片0.1g和NaHCO30.05g,蒸餾，收集182。C餾份，稱取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶內(nèi)放冰箱備用。 2.3 標準曲線繪制     精確量取葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥試管中，分別加水使成1.0ml，再分別加入5%苯酚溶液1.6ml，搖勻，然后加H2SO4 7.0ml，充分搖勻，室溫放置25min，在400～600nm處測定其最大吸光度，同時做一空白。結(jié)果見表1 表1不同濃度葡萄糖的吸光度 葡萄糖標準液(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 濃度(ug/ml) 0.00 1.05 2.10 3.15 4.20 5.25 6.30 7.35 吸光度值A(chǔ) 0.000 0.0735 0.1458 0.2235 0.2945 0.3798 0.4420 0.4973 3 多糖的提取及精制     取板藍根洗凈，晾干，精密稱取100g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90°C）、乙醚和80%乙醇回流提取4h。殘渣用乙醚、無水乙醇反復(fù)洗滌，得板藍根多糖。60°C烘干備用。 4 換算因素測定 精確稱取60°C干燥恒重的板藍根多糖20mg，水溶解后定容到100ml量瓶中，搖均，作為多糖儲備液。 精確量取多糖儲備液0.2ml，加水至1ml，按測定標準曲線同樣的方法測其吸光度值。按下式計算換算因素。        f=W/CD 式中：W為多糖重量(ug)，C為多糖液中葡萄糖的重量(ug)，D為多糖的稀釋倍數(shù)。測得f=4.7829。 5樣品測定     精確分別稱取板藍根粉未0.2g、0.201g、0.203g，用80%乙醇回流2h，殘渣揮去溶劑后，繼續(xù)用水回流2h，反復(fù)洗至250ml量瓶中，定容，搖勻成為樣品液。測定時，精確吸取樣品液1ml，按測定標準曲線同樣方法測其吸光度值，按下式計算多糖含量：         多糖含量%=CDf/W*100% 式中：C為樣品溶液的葡萄糖的重量(ug),D為樣品溶液的稀釋倍數(shù)，f為換算因素，W為樣品的重量(ug)，測得平均結(jié)果為0.8099%=0.28%(n=3) 6 回收率測定     精密稱取板藍根粉未0.15g，精密加入板藍根多糖7mg，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，殘渣揮去溶劑后，連續(xù)用水回流2h，反復(fù)洗至250ml量瓶中定容。搖勻后，清確移取1ml，按測定標準曲線進行提取和測定。計算多糖含量，平均回收率為98.74%,RSD=1.86%(n=5)。 7 討論     多糖廣泛存在于自然界，是多種中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性，是理想的免疫增強劑，它能提高機體免疫系統(tǒng)的功能，不僅能促進T細胞、B細胞、NK細胞、M細胞等免疫細胞的功能，還能促進白間素、干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子的產(chǎn)生。目前對多糖的研究方興未艾，多糖的作用機理以及生物功能與結(jié)構(gòu)的關(guān)系的研究不斷深入，而且不斷有新的多糖物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)。我們從板藍根中提取出板藍根多糖，并對其含量進行了測定。研究表明，板藍根多糖含量不是很高，提取方法有待進一步改進。板藍根多糖的結(jié)構(gòu)組成和生理活性也有待進一步研究。