飛機草的急性毒性試驗*

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飛機草的急性毒性試驗* 陳進軍1聶芳紅2林紅英1李淑紅1 （1湛江海洋大學農學院；2湛江海洋大學食品科技學院，廣東湛江524088） 中圖分類號：S852.6

摘要：利用體重26～32g的一級昆明種雌性小白鼠，口腔灌服飛機草水煎劑，采用改良寇氏法，測定了飛機草全草的急性半數致死量LD50，并觀察了供試小白鼠的臨床表現。結果發(fā)現，飛機草全草對一級昆明種雌性小白鼠的LD50為227091.04mg/kg，95%可信限為227090.99～227091.09 mg/kg，說明飛機草水煎劑對昆明種雌性小白鼠實際無毒。急性死亡小鼠（劑量達到162562.3mg/kg以上）在死前表現腹瀉，呼吸困難，眼球突出，身體抽搐；未死亡的小鼠個別表現呼吸加深加長，心跳加快，瞳孔散大，出汗，有拒食現象，后又恢復，身體消瘦后又正常，糞便不成形。 關鍵詞：飛機草煎劑急性毒性小白鼠     飛機草( Eupatorium odoratum Linn) 為菊科澤蘭屬多年生草本植物，又名香澤蘭[1]。原產于中美洲，在南美洲、亞洲、非洲熱帶地區(qū)廣泛分布，生于山坡、曠野、路旁。中國臺灣、廣東、香港、澳門、海南、廣西、云南、貴州等地大量生長。能產生化感物質，抑制鄰近植物的生長，使昆蟲拒食，具有殺滅棉鈴蟲和某些真菌的作用[2-4]。它與南美蟛蜞菊（Wedelia trilobata）、微甘菊（Mikania micrantha）、五爪金龍（Ipomoea cairica）和豚草（Ambrosia artemisiifolia）共同被列為廣東重點滅除的5種外來入侵植物[5]。本品全草入藥，多外用，具有止血殺蟲的作用。全草含揮發(fā)油、香豆素、谷甾醇及黃酮類化合物[1,6]。對于飛機草的中草藥藥理學和毒理學的研究尚未見報到。本研究制備飛機草水煎劑，進行飛機草的急性毒性試驗，為使飛機草變害為寶，將其作為中草藥加以利用，減滅飛機草的生態(tài)危害積累資料。 1材料與方法 1．1 飛機草于夏季采自廣東省湛江市湖光巖東。經湛江海洋大學農學院植物分類學副教授吳鈿鑒定（圖1）。陰干粉碎，貯存于干燥陰涼處備用。 1．2 小白鼠一級昆明種雌性，體重26—32g，購于中國人民海軍四二二醫(yī)院（廣東湛江）。 1. 3 預備試驗 1.3.1飛機草水煎劑的制備     稱取飛機草粉末100g，置于砂鍋中，加水淹沒2cm，浸泡30min，直火加熱煮沸30min，其間不斷攪拌。待溫后過濾，得藥液。藥渣依上法重煎一次。合并兩次濾液，加入活性炭過濾。濾液在60℃恒溫水浴中濃縮至20mL，即得每毫升相當5g飛機草的水煎劑。冷藏于4℃?zhèn)溆谩?br /> 1.3.2動物分組與飼養(yǎng)管理     將12只供試小白鼠隨機等分為4組，記為飛機草水煎劑預試1、2和3組及蒸餾水對照組。以組為單位分籠飼養(yǎng)，標記并登記，喂給清潔級專用鼠料（廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供）和溫開水。自然光照。 1.3.2給藥方法和劑量     采用灌胃法。用9號注射針頭（針尖打磨鈍圓、光滑），從口腔插入食道口給藥。灌胃前禁食10h，自由飲水，動物灌胃后3h以后再復食。對照組同法灌給蒸餾水。以300mg/kg為最低劑量，用10倍稀釋的飛機草水煎劑系列藥液，依次序貫取三個濃度用3組（每組3只，另設蒸餾水對照組）雌性小鼠灌服給藥。找出引起動物100% 死亡的劑量(Dm)[7,8]。 1．4正式試驗—改良寇氏法     按改良寇氏法設計，各劑量組隨機分配小鼠10只，一共5組，以Dm為最高劑量，組間劑量比值確定為1︰0.85[8,9]。按“低比稀釋法”配藥，分別按方案（表1）灌服供試藥物一次。試驗完畢后，統計各組死亡率，按（1）式計算LD50。 LD50=lg-1[Xm—i(ΣP―0.5)] ………………………………………………(1) 其中，Xm：最大劑量組劑量的對數。 i：相鄰兩組高劑量與低劑量之比的對數。 P：各組動物的死亡率，用小數表示。 ΣP：各組動物死亡率的總和。 再按（2）式和（3）式求出 LD50的平均可信限。 Sx50=i×[(ΣP—ΣP2)/(n—1)]1/2……………………………………………(2) 其中，Sx50：lgLD50的標準誤。 X50：lgLD50。 n：每組動物數。 ΣP2：各組動物死亡率平方之和。 LD50 95%可信限FL=lg-1 (X50±1.96Sx50)………………………...………(3) LD50 95%平均可信限=LD50±（LD50高限—LD50低限）/2….....………(4) 上述(4) 式即為LD50的最后表示。 1．5臨床觀察     試驗開始后，觀察120h，記錄小白鼠灌藥后的表現及死亡數。死亡小白鼠及時剖檢，試驗結束后剖檢全部供試小白鼠。 2結果 2．1 供試小白鼠的主要表現     在灌服飛機草水煎劑后第一天，各組供試小白鼠普遍表現毛發(fā)不潔、松散、無光澤，步態(tài)不穩(wěn)，感覺過敏，爾后反應遲鈍甚至消失。在整個試驗過程中，個別小白鼠出現呼吸加深加長，心跳加快，瞳孔散大，出汗。有拒食現象，后又恢復，身體消瘦后又正常。糞便不成形。小鼠臨死前腹瀉，呼吸困難，眼球突出，身體抽搐。剖檢發(fā)現，供試小鼠皮下血管充血，腸系膜充血，有的盲腸壞死，胃黏膜充血，肝、腎均局部有白色小斑，有壞死灶，心腔充滿凝血。 2．2 飛機草對供試小白鼠灌胃的LD50     預備試驗測得Dm為300000mg/kg。飛機草對供試小白鼠灌胃的LD50測定原始結果如表1所示。 表1飛機草對昆明種小白鼠灌胃的LD50測定結果 Table 1. Results for measuring LD50 of Eupatorium odoratum Linn. administered orally in female Kunming mice 組別 Group 小鼠只數 (n) Mice (n) 劑量（d, mg/kg） Dose (d, mg/kg) lgd (X) lgd (X) 死亡小鼠只數 Mice died 死亡率（P） Mortality (P) P2 P2 1 10 138176.2 5.1404 0 0 0 2 10 162562.3 5.2110 1 0.17 0.02 3 10 191250.0 5.2816 3 0.5 0.25 4 10 255000.0 5.4065 3 0.5 0.25 5 10 300000 5.4771 6 1 1 ΣP=2..17 ΣP2=1.52 據表1，可計算出LD50= lg-1[Xm—i(ΣP—0.5)] =lg-1[5.4771—0.0706×(2.17—0.5)] =lg-15.3592=227091.04 據（3）式可計算出LD50 的95%可信限FL=lg-1(5.3592±1.96×0.026) =lg-1(5.3592±0.051) =5.3082 ~5.4102 LD50 的95%平均可信限=LD50±（LD50高限—LD50低限）/2 =227091.04±0.051=227090.99～227091.09 亦即飛機草對供試小白鼠灌胃的LD50為227091.04mg/kg，95%可信限為227090.99 ~227091.09 mg/kg。 3 討論與結論     能使全群動物半數死亡的劑量稱為半數致死量，即LD50，它是標志藥物、毒物和感染物毒力強度的一種重要常數。化學物依據LD50大小可以分為極毒、劇毒、中等毒、低毒和實際無毒5級[9]。飛機草對供試小白鼠灌胃的LD50為227091.04mg/kg，因而可以認為飛機草對供試小白鼠口服實際無毒。     作為一種生物入侵植物，飛機草在我國的蔓延已經成為農業(yè)和畜牧業(yè)的頭疼問題。飛機草在某些地區(qū)如海南的分布分布，占98.3%。只要飛機草侵占了草場，爭陽光，爭水分，爭肥料草場兩三年就失去利用價值。侵入農耕地，造成糧食減產3%～11%，桑葉、花椒減產4%～8%，香蕉植株少2至3片葉，矮1m左右，幼樹難以成林，經濟林木推遲投產。飛機草含有一種次生代謝物質，坡鹿如果采食太多，會引起消化不良等癥狀，開花時可引起馬的支氣管炎，用來墊圈或下田沃肥會引起牲畜的蹄叉，還能引起人的過敏性疾病和手腳皮膚炎[2,3,5,10]。     飛機草的防除已取得一些進展，其中以香澤蘭燈蛾、香澤蘭嬰實蠅最具潛力。香澤蘭燈蛾的幼蟲會啃食大量的飛機草葉片；香澤蘭嬰實蠅的成蟲會在飛機草的莖中產卵，形成蟲嬰，每個蟲嬰可以孵化許多只幼蟲，幼蟲取食飛機草的莖時，會破壞其輸導系統，使飛機草整株枯萎死亡[5,10]。飛機草的抽提物對小菜蛾雌蟲的產卵有驅避作用。植物揮發(fā)油對黃曲條跳甲成蟲都具有很強的驅避作用。飛機草的乙醇提取物對荔枝蒂蛀蟲成蟲產卵的驅避作用效果在80%～90%之間[2,4,10]?？梢妼︼w機草進行生物防除和作為研制無公害農藥資源而加以利用，已經進行了多方面的嘗試并取得了一些可喜的成果。     從中草藥的角度來看，可以借助飛機草繁殖力極強、產量極高和來源廣的特點，通過中藥炮制、有效部位提取、不同制劑研制、不同使用方法篩選研究等措施，改變飛機草作為中草藥的藥物性能，擴大應用范圍，增加有效成分的含量。本試驗發(fā)現，飛機草的毒性為實際無毒?？赡苁且驗樵陲w機草水煎劑的制備過程中，飛機草中的一些毒性較大但揮發(fā)性強的化學成分被去除了，使有毒成分減少或改變了。

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