鹽酸甜菜堿安全性的初步評價

wlei908 · 發(fā)表于 2010-3-3 12:32:38

鹽酸甜菜堿安全性的初步評價

汪以真1，王友明1，傅劍云2

(1浙江大學飼料科學研究所教育部動物分子營養(yǎng)學重點實驗室，浙江杭州310029；2．浙江省衛(wèi)生防疫站，浙江杭州 3lOO08)

摘要：通過大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗，大鼠蓄積毒性試驗、致突變試驗(小鼠微核試驗和小鼠精子畸形試驗)，探討了鹽酸甜菜堿作為畜禽飼料添加劑的安全性。結果表明，鹽酸甜菜堿屬實際無毒類物質，無明顯蓄積作用，無致突變性，是一種安全的飼料添加劑。

關鍵詞：鹽酸甜菜堿；安全性；評價；飼料添加劑；小鼠；大鼠

甜菜堿的化學本質是三甲基甘氨酸，在動物體甲基代謝中起著非常重要的作用。它能促進畜禽生長，降低胴體脂肪沉積，提高畜禽胴體品質和肉的色、香和味。因而，廣泛用于畜禽飼料添加劑。甜菜堿的毒性較小，大鼠靜注2.4g/kg未見毒性產(chǎn)生,小鼠皮下注射LD50為l8.1 g/kg,但有關鹽酸甜菜堿的安全性毒理學評價尚未見報道。

l.材料與方法

1.1 受試物

　　鹽酸甜菜堿，浙江大學飼料科學研究所生產(chǎn)，樣品為白色晶體。

1.2 動物

昆明種小鼠，浙江省藥檢所實驗動物中心提供(合格證號：浙動字第22-9601017)；SD大鼠，浙江省實驗動物中心提供(合格證號：浙實驗動物質量準字96001號)。

1.3 陽性對照物
　　環(huán)磷酰胺，上海第十二制藥廣生產(chǎn)。

1.4 急性毒性試驗
　　取健康小鼠、大鼠各4O只(小鼠體重18～22g，大鼠180～220g)，觀察1周后，隨機分成4個劑量組(每組10只，雌雄各半)，即2.15、4.64、10.00和21.50g/kg。樣品用蒸餾水配制，按等容量法(小鼠每10g體重0.2ml,大鼠每100 g體重2ml)灌胃接毒。采用24h一次經(jīng)口灌胃方式。染毒后，每日觀察動物中毒癥狀和死亡情況．記下2周內(nèi)動物數(shù)。采用Horn法計算LD50及其95%可信限。

1.5 蓄積毒性試驗

取健康大鼠50只，體重(200土20)g，采用20d蓄積法按體重隨機分組，每組10只，雌雄各半。按1/20、1/10、1/5、1/2 LD50劑量，設樣品每公斤體重0.3、0.6、1.2、3.0g 4個劑量組和蒸餾水對照組。樣品用蒸餾水配制，經(jīng)口每天灌胃1次，連續(xù)20d，每4d稱重1次。

試驗開始至染毒結束后7d．每天觀察大鼠的一般狀況、中毒癥狀和死亡情況。根據(jù)大鼠死亡情況確定蓄積毒性強度。用t檢驗法檢測染毒4、8、12、16和2Od 以及停止染毒后第7天各劑量組與對照組大鼠體重的差異性。

1.6 骨髓微核試驗
　　取健康小鼠5O只(體重22～26 g)，隨機分成5組，設樣品每公斤體重1.25、2.50和5.00 g 3個劑量組,另設空白對照(蒸餾水)和陽性對照(環(huán)磷酰胺40mg/kg)。每組lO只小鼠,雌雄各半,樣品用蒸餾水配制,按每10 g體重0.1 ml計算灌胃量。采用間隔24 h
2次給樣品，第2次給樣后6 h處死動物，取其胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa(pH=6.4)染色，鏡檢。每只動物觀察1000個骨髓嗜多染紅細胞(PCE)，同時計數(shù)正染紅細胞(NCE)及含微核的嗜多染紅細胞(MNPCE)，計算微核千分率(MN‰)，以卡方檢驗法檢測受試物劑量組與陰性對照組間差異的顯著性。

1.7 精子畸形試驗

取健康雄性小鼠50只(體重23～27g)，如上1.6分組。樣品用蒸餾水配制,按每10g體重0.1m1計算灌胃量。每天灌胃1次，連續(xù)5d，對照組也同樣處理。在首次給樣品的第35天，頸椎脫臼處死小鼠，取兩側附睪，放入盛有生理鹽水的平皿中剪碎，經(jīng)4層擦鏡紙吸濾，直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1% 伊紅染色，高倍鏡下檢查精子形態(tài)。每只小鼠檢查完整精子1000個，記錄畸變精子的類型和數(shù)目，計算畸形率(%)。同樣以卡方檢驗法檢測差異的顯著性。

2 結果與討論

2.1 急性毒性試驗

見表1。經(jīng)Horn氏法計算，鹽酸甜菜堿對小鼠雌、雄性經(jīng)口LD50值為5.84g/kg,95%可信限為4.3O～ 7.94 g/kg；對雌性大鼠經(jīng)口LD50值為6.81g/kg,對雄性大鼠

經(jīng)口LD50值為5.84 g/kg,95%可信限為4.3O～7.94 g/kg。根據(jù)急性毒性分級標準，該樣品為實際無毒類。

2.2 蓄積毒性試驗

　　見表2,3。試驗期間各組大鼠呈階段性增長。在同一染毒時間中，各劑量組大鼠的體重與對照組比較無顯著差異性(P>0.05)，停止染毒后第7天，0.3、1.2和3.0g/kg劑量組雌性大鼠的體重分別比對照組增加明顯(P<0.05),但雄性大鼠各劑量組體重未見明顯增加。試驗大鼠死亡情況無劑量反應關系。可以認為鹽酸甜菜堿無明顯蓄積作用。

2.3 骨髓微核試驗

　　見表4。陽性對照物(環(huán)磷酰胺)可引起小鼠骨髓細胞微核率明顯升高，與陰性對照組比較，差異極顯著（P<O.01)。而在鹽酸甜菜堿各劑量組，中、低劑量組細胞微核率有所升高，但與陰性對照組比較．差異不顯著(p>0.05)，表明鹽酸甜菜堿小鼠微核試驗結果為陰性。

2.4 精子畸形試驗

　　見表5。環(huán)磷酰胺可引起小鼠精子畸形率明顯升高，與陰性對照組比較差異極顯著(P<0.01)。3個劑量組精子畸形率與陰性對照組比較差異不顯著(p>0.05),表明鹽酸甜菜堿小鼠精子畸形試驗為陰性。

參考文獻
略

Evaluation on Safety of Betaine Hydrochloride

WANG Yi- zhen1，WANG You-ming1，F(xiàn)U Jia- yun2 (1.Feed Science Institute,Zhejiang University,the Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed of Chinese Agriculture Ministry，Hangzhou 310029，China；2.Zhejiang Health and Anti-epidemic Station，Hangzhou 310009，China)

Abstract：In order to evaluate the toxicology of safety of betaine hydrochloride，the general tests for acute，accumulative toxicity in
mice and rats:the special tests for effects on mutagenicity (the micronucleus test for cytogenetics analysis in mice and rats.the test for sperm abnormality in mice)were conducted．The results of above-mentioned tests showed that betaine hydrochloride have no toxicity,accumulation toxicity and mutagenicity and can be used as safe feed additive.

Key words：betaine hydrochloride;safety;evaluation;feed additive;mouse;rat