桔梗乙醇提取物的急性及蓄積性毒性試驗(yàn)

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　　桔梗乙醇提取物的急性及蓄積性毒性試驗(yàn)

　　金錫九 張敏 張亞麗

　　(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，吉林省龍井市 133400)

　　摘要：本試驗(yàn)用昆明種小白鼠對(duì)桔梗提取物進(jìn)行了急性及蓄積性毒性試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)結(jié)果如下：急性試驗(yàn)LD50>30360mg/Kg,蓄積性試驗(yàn)所測(cè)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)明顯差異。說(shuō)明桔梗提取物對(duì)小白鼠無(wú)急性和蓄積性作用。
　　關(guān)鍵詞 桔梗提取物;小白鼠;急性試驗(yàn);蓄積性試驗(yàn)
　　Platycodon grandiflorum alcohol extracts the thing impatient disposition and accumulates the toxicity experiment
　　Jin xijiu zhangmin zhang yali
　　(Zoology Department of Yanbian University , Longjing , Jilin Province 133400))
　　Abstract:This experiment withdrew the thing with the Kunming mice to the platicodon grandiflorum to carry on has been more systematic acute and the accumulation toxicity text. after the test result to be as follows：The acute tries LD50>30360mg/Kg，the accumulation toxicity text measured indicators experimental group and the control group there was no difference. Note Campanulaceae extract on mice without acute and accumulation role.
　　Keywords ：The platicodon grandiflorum withdraws the thing; mice; acute toxicity test, the accumulation toxicity text.
　　桔梗是吉林省有名的中草藥材之一，長(zhǎng)白山區(qū)分布著非常豐富的桔梗種質(zhì)資源，該地區(qū)具有發(fā)展桔梗的得天獨(dú)厚的地理優(yōu)勢(shì)和資源優(yōu)勢(shì)[1]。
　　桔梗含桔梗皂苷、桔梗酸、桔梗糖、菊糖等[2]。中醫(yī)臨床上桔梗主要用于寒熱虛實(shí)引起的咳嗽、痰喘[3]，近年來(lái)，作為藥食同源的傳統(tǒng)中藥，也用于免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗?jié)?、抗腫瘤、降血壓、降血脂、擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解熱、降血壓、降血糖、抗過(guò)敏等。藥理實(shí)驗(yàn)表明桔梗有較多的生理活性，具有較大的研發(fā)價(jià)值[4。5]。為了研究桔梗提取物作為飼料添加劑并長(zhǎng)期應(yīng)用于畜禽產(chǎn)業(yè)中是否會(huì)引起毒害反應(yīng)，因此特就桔梗提取物進(jìn)行本項(xiàng)毒理試驗(yàn)。希望通過(guò)本項(xiàng)試驗(yàn)可以了解桔梗提取物的安全性，以及對(duì)家畜的限量標(biāo)準(zhǔn)，為合理的利用該添加劑提供理論依據(jù)。
　　1材料與方法
　　1.1 試驗(yàn)材料
　　試驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供。
　　受試物 桔梗提取物由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供。桔梗由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)系提供，系3年生，清洗干凈后，切片、低溫烘干。
　　1. 2 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)
　　飼料為全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料，試驗(yàn)組的飼料成份是在標(biāo)準(zhǔn)日糧的基礎(chǔ)上添加不同比例的桔梗提取物。飼養(yǎng)溫度22-25℃，濕度40%-60%，自然采光?；A(chǔ)飼料成分見(jiàn)表1。
　　表1 小白鼠全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料配方

成 分	玉 米	豆 粕	芝麻粕	白 面	大 米	高 梁	麥 麩	草 粉	魚(yú) 粉	花 生	奶 粉	雞 蛋	骨 粉	食 鹽	礦物質(zhì)	維 生 素
含量（%）	25	23	5	15	5	4	4	3	5	5	5	1.5	2	0.5	0.5	0.5

　　1.3實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.3.1桔梗提取物乙醇提取方法
　　取桔梗5kg洗凈烘干，將烘干的桔梗加入95%乙醇溶劑浸泡24小時(shí)，乙醇應(yīng)將桔梗沒(méi)過(guò)30-40cm為宜，將乙醇用四層紗布放在漏斗中過(guò)濾，將過(guò)濾出的含有桔梗成分的浸提物倒入索氏提取器中進(jìn)行回流，水浴鍋溫度為乙醇沸點(diǎn)80攝氏度，回流3次，將乙醇進(jìn)行回收，將剩余的含有桔梗成分的液體進(jìn)行水浴加熱，制成膏狀物取出放入冰箱內(nèi)儲(chǔ)存待用。
　　1.3.2急性毒性試驗(yàn)
　　取20～22g小白鼠，共設(shè)6組，每組10只，雌雄各半，按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg體重服毒，另設(shè)對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組添加劑在7天內(nèi)灌胃給藥，對(duì)照組灌服蒸餾水。小鼠禁食8小時(shí)(不禁水)后進(jìn)行投毒給藥后3-4小時(shí)復(fù)食，給藥停止后連續(xù)觀察7天，并觀察小鼠精神、食欲、飲水、活動(dòng)并記錄小白鼠的中毒情況、死亡時(shí)間和死亡數(shù)目。
　　1.3.3蓄積毒性試驗(yàn)
　　取20～22g小白鼠，共設(shè)5組，每組10只，雌雄各半，按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg體重服毒，另設(shè)對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組添加劑混入飼料中飼喂，對(duì)照組喂正常的無(wú)添加劑的飼料連續(xù)飼喂20天， 在給藥期間觀察小白鼠的精神、食欲、飲水及死亡情況和有無(wú)異常反應(yīng)，給藥停止后觀察7天內(nèi)小白鼠的死亡情況及體重和有無(wú)異常反應(yīng)的一般變化。同時(shí)測(cè)量指標(biāo)如下：
　　(1)一般性指標(biāo) 記錄小鼠采食量，每周稱量小鼠體重。計(jì)算平均體增重、平均飼料采食總量、平均日飼料采食量、飼料料重比(F/G)。
　　平 均 體 增 重 = 實(shí) 驗(yàn) 末 重 - 始重
　　平均飼料采食總量=試驗(yàn)初的飼料量-試驗(yàn)?zāi)┑氖Ａ狭?br /> 　　平均日飼料采食量=總的飼料消耗量/試驗(yàn)天數(shù)
　　飼料料重比(F/G)=平均日飼料采食量/平均日增重。
　　(2)臟器系數(shù) 取心、肝、脾、肺、腎稱重，計(jì)算臟器體重比值。
　　1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
　　用SPSS11.5進(jìn)行單因素方差分析，采用多個(gè)試驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間的兩兩比較方法統(tǒng)計(jì)。試驗(yàn)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
　　2 結(jié)果
　　2.1 急性毒性試驗(yàn)
　　按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg劑量混飼后，7天后觀察，各劑量組小白鼠的精神、食欲、飲水等情況和對(duì)照組比較均無(wú)異常，未出現(xiàn)死亡及其它異常行為，按照毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)LD50>15000mg /Kg時(shí)屬于實(shí)際無(wú)毒性物質(zhì)，可不必測(cè)定半數(shù)致死量(LD50)。本試驗(yàn)結(jié)果LD50>30360mg/Kg表明桔梗提取物作為中草藥添加劑屬于實(shí)際無(wú)毒類物質(zhì)[6、7]。
　　2.2 蓄積性毒性試驗(yàn)
　　按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg劑量混飼，連續(xù)飼喂20天，在給藥期間及7天觀察期內(nèi)，各試驗(yàn)組小白鼠未出現(xiàn)死亡，精神、飲食和飲水無(wú)異常同時(shí)也未出現(xiàn)其它異常行為，結(jié)果表明桔梗提取物無(wú)蓄積毒性作用。
　　2.2.1一般性指標(biāo)測(cè)定
　　平均體增重、平均飼料采食總量、平均日飼料采食量見(jiàn)表2.
　　表2不同劑量的藥物對(duì)小白鼠生長(zhǎng)的影響

項(xiàng)目	對(duì)照組	試驗(yàn)組
劑量mg/kg	0	200	400	800	1600
觀察頭數(shù)（只）	10	10	10	10	10
供試天數(shù)（天）	20	20	20	20	20
平均始重（g）	18.46±1.92	18.62±1.32	18.75±1.78	18.44±1.71	18.62±1.53
平均末重（g）	38.64±2.29	37.56±3.20	37.98±2.57	38.82±1.13	38.38±5.10
耗料（g）	128.40± 8.1	130.07±2.49	130.40±6.19	130.17±5.70	134.63±6.94
凈增重（g）	20.18±0.26	18.94±1.96	19.23±2.86	20.38±0.20	19.76±1.68

　　注：與對(duì)照組比較，*P<0.05 ** P<0.01
　　由表2可知，經(jīng)20天給藥后，各劑量組小白鼠的平均增加體重及每只耗料與對(duì)照組相比較差異不顯著(P>0.05)。
　　2.2.2 臟器系數(shù)的測(cè)定
　　在飼料中以200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg劑量加入桔梗提取物飼喂小鼠20天，撲殺受試鼠，取主要臟器稱重，測(cè)定臟器系數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表3。
　　表3 桔梗提取物對(duì)小鼠臟體比的影響

組別	心/體	肝/體	脾/體	肺/體	腎/體
對(duì)照組	0.439±0.055	4.307±0.148	0.345±0.047	0.570±0.071	1.034±0.066
200mg/Kg	0.443±0.054	4.398±0.313	0.351±0.075	0.609±0.075	1.139±0.110
400mg/Kg	0.451±0.041	4.627±0.409	0.341±0.113	0.618±0.081	1.142±0.054
800mg/Kg	0.408±0.044	4.540±0.349	0.350±0.088	0.693±0.22	1.033±0.126
1600mg/Kg	0.440±0.043	4.475±0.409	0.335±0.109	0.632±0.103	1.140±0.104

　　注：在不同組間不同字母表示差異顯著,大寫(xiě)字母為P<0.01,小寫(xiě)字母為P<0.05
　　由表3可知，給予受試物20天后，各試驗(yàn)組與對(duì)照組之間臟器系數(shù)差異不顯著(P>0.05)，各試驗(yàn)組間差異也不顯著(P>0.05)。
　　3 結(jié)論
　　3.1急性毒性試驗(yàn)
　　當(dāng)LD50>30360mg/Kg時(shí)小白鼠仍未出現(xiàn)死亡及其它異常行為，表明桔梗提取物屬于實(shí)際無(wú)毒類物質(zhì)。
　　3.2蓄積試驗(yàn)
　　20天給藥后，各試驗(yàn)組和對(duì)照組的小白鼠均無(wú)異常表現(xiàn)和死亡，同時(shí)試驗(yàn)組凈增重、耗料量及臟器系數(shù)的測(cè)定與對(duì)照組均無(wú)明顯差異。表明桔梗提取物無(wú)蓄積作用。
　　綜上所述，桔梗提取物屬于無(wú)毒性物質(zhì)，如將其作為飼料添加劑應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中，便可以取代抗生素，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中有著廣泛的應(yīng)用前景。
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海綿

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