影響酶制劑使用的主要影響因素 1、溫度
飼料加工中過高的溫度可能破壞飼料中添加酶的活性。除了極個別酶可以在90℃左右高溫保持結(jié)構(gòu)和功效的穩(wěn)定,大多數(shù)不具有耐受70℃以上高溫的性質(zhì)。微生物生產(chǎn)的酶有的能耐高溫有的不能耐高溫。如耐高溫α-淀粉酶其作用最適溫度為110℃,在40℃左右的溫度條件下酶活性很低。動物胃腸道的溫度一般在38℃-39℃,這樣的酶在動物的胃腸道中所能起的作用非常有限。在飼料工業(yè)中所要求的酶制劑最好是既能耐高溫(85℃-100℃,顆粒料制粒溫度),在低溫(40℃左右)條件下又有較高的酶活性。
2、加工設(shè)備:
??椎闹睆胶铜h(huán)模的厚度也有影響。有數(shù)據(jù)顯示直徑為2mm的模孔造成的酶活損失要比4mm的??状蟮枚?。在較低的調(diào)質(zhì)溫度下,??椎拈L度越長,酶活損失越大,這是由于磨擦引起??變?nèi)物料溫度上升,造成植酸酶活損失加大。經(jīng)保護處理的植酸酶分別用2×40mm和4×50mm兩種規(guī)格的???,在常規(guī)條件下,制備肉仔雞料和乳豬料,并把制備的顆粒在不同溫度下存放2周。 在71℃調(diào)質(zhì),肉仔雞料中的植酸酶活力明顯下降。在82℃酶活保留率為40%,而對乳豬料在82℃調(diào)質(zhì)酶活保留率為60%,這意味著顆粒越大,酶活的保留率越高。另外飼料組份對植酸酶的穩(wěn)定性也有重要影響,脂肪含量高的飼料,如肉仔雞料,在通過??讜r由于磨擦少,溫度上升小,酶活的保留率要比富含粗纖維的豬飼料中酶活的保留率高得多。 3、PH值
酶制劑發(fā)揮作用受到動物體消化道環(huán)境的影響, 由于動物消化道食糜的pH值變化范圍很大,所以單純考慮在某個pH值條件下的酶活表現(xiàn)值是不全面的,最好能測定該酶活組分在比較廣泛的pH值范圍內(nèi)的活力表現(xiàn)。? 。
木聚糖酶和β-葡聚糖酶在pH值2.5的條件下活性很低,在pH值3.5略有升高,各種酶的最高酶活在pH值為4.5或5.5。酶在經(jīng)歷了胃中較低的pH值又重新進入小腸后,小腸中的pH值較適合酶發(fā)揮作用。 植酸酶的最適PH值一般在2~6之間。植物來源的植酸酶最適pH為4.0-7.5,大多數(shù)在5.0-6.0,不適合在單胃畜禽酸性的胃中起作用。細菌來源的植酸酶最適pH一般為中性或偏堿性。真菌植酸酶為2.5-7.0。黑曲霉A.nigerNRRL3135產(chǎn)生兩株不同的植酸酶,一株最適pH值為5.5(phyA),另一株最適pH為2.0和5.5 (phyB)。Newman等人在1991年發(fā)現(xiàn)由Aspergillus nigerman生產(chǎn)的植酸酶在PH5.0-6.5時,具有最強活性。 4、內(nèi)源酶
胃蛋白酶和胰蛋白酶均可使外源酶活性降低。
Eric Rodriguez等通過黑曲霉植酸酶r-PhyA及大腸桿菌Ph2.5酸性植酸酶對胰蛋白酶和胃蛋白酶消化活性的研究,發(fā)現(xiàn)r-phyA對胰蛋白酶更具有抗性,但對胃蛋白酶抗性不如后者。后者在胃蛋白酶作用下,活性出乎意料的增加了30%,而r-phyA則失去了58%-77%的初始活性,從分子水平研究結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系并對其進行改造,增加酶在腸道中對蛋白酶的抗性和活力。 我國在木聚糖酶、淀粉酶和高比活植酸酶的開發(fā)中取得了顯著的進展,3種酶制劑在pH2-7的范圍內(nèi)都保持了較高的活性,最適反應(yīng)溫度在50-55℃,即使在80℃高溫作用30分鐘后,3種酶的剩余活性仍可達到89%、74%和85%。3種酶制劑還表現(xiàn)了極好的耐蛋白酶活性,經(jīng)0.1mg/ml胃蛋白酶或胰蛋白酶作用1小時后生物活性不受影響。其中,植酸酶的比 活性可達到360萬U/mg,是國外基因工程曲霉生產(chǎn)的植酸酶比活性的36倍,生產(chǎn)表達量達到2.2克/升發(fā)酵液;木聚糖酶比活性達到2869U/ml,生產(chǎn)表達量達到2.3克/升,而國外較好的比活性只有1250-2100U/ml;淀粉酶的生產(chǎn)表達量也達到了3克/升,屬于國際先進水平。2001年我國在飼料用酶制劑方面申請的發(fā)明專利達到了12項之多,分離克隆的新基因超過12個。 5、日糧因素
(1)飼料種類
添加微生物植酸酶,谷物中磷的消化率從18%提高到56%,小麥中植酸磷的消化率從62%提高到74%,黑小麥中植酸磷的消化率從52%提高到67%。在谷物中植酸磷消化率增加值較高。 原因可能是在pH4~7之間谷物植酸鹽的溶解度比小麥中植酸鹽的溶解度高。
小麥和黑麥中主要的非淀粉多糖是阿拉伯木聚糖,小麥和黑麥日糧的非淀粉多糖酶制劑應(yīng)主要含木聚糖酶;大麥和燕麥中除了阿拉伯木聚糖外主要是β-葡聚糖,大麥和燕麥日糧的非淀粉多糖酶制劑則主要含β-葡聚糖酶及較少量的木聚糖酶。
纖維素酶對不同纖維源的日糧作用有差異,不同纖維源日糧的改善程度也不同,添加纖維素酶對稻谷日糧總能代謝率的提高幅度大于草粉日糧。 (2)飼料中的鈣、磷比
鈣和植酸鹽結(jié)合會形成不溶性的復合物,所以日糧中鈣過量,會對磷的利用產(chǎn)生負影響。植酸酶能釋放鈣,提高飼料中鈣的利用率。鈣含量過高可能會引起pH升高,使植酸酶不能充分發(fā)揮作用。 6、飼料中酶的抑制作用
酶抑制劑在谷物中的作用目前還沒有完全揭示。據(jù)推測這是植物本事的保護機制之一,另外在植物發(fā)芽的過程中細胞壁破裂時可能會發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。內(nèi)切酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)在谷物的化學性質(zhì)和應(yīng)用技術(shù)上有很重要的應(yīng)用意義,微生物發(fā)酵產(chǎn)生的木聚糖酶發(fā)揮效率的程度在很大程度上受到抑制劑的存在的影響。因此如果需要在飼料中使用降解木聚糖的酶,最好是選擇對抑制劑敏感度低的酶。 |