飼用微生態(tài)抗菌肽的研究進展

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　　山東寶來利來生物股份有限公司創(chuàng)立于1996年8月，是中國規(guī)模最大的動物微生態(tài)產(chǎn)品供應商，及微生態(tài)技術(shù)和解決方案服務商。自2006年1月起立項研制抗菌肽，并與中國科學院海洋研究所聯(lián)合承擔國家科技部“863計劃”課題--抗病功能性蛋白藥物的研制，歷經(jīng)6年科技攻關(guān)，終于在2012年1月研制成功CEC-38抗菌肽。該抗菌肽由乳酸菌LP55高效表達，由38個氨基酸殘基組成，擁有兩個α螺旋。具有顯著地抗菌、抗病毒及抗原蟲生物活性，純品殺菌效價高達500000國際單位。

　　1.抗菌肽CEC-38性質(zhì)及作用
　　抗菌肽CEC-38是一株乳酸菌LP55經(jīng)誘導產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子多肽，在生物進化上是一類非常古老而有效的天然防御物質(zhì)。分子量4000道爾頓，由38個氨基酸殘基組成，擁有兩個α螺旋?？咕腃EC-38具有弱堿性，熱穩(wěn)定性，在100℃加熱15min仍能保持其活性，對較大的離子強度、胃酸和膽鹽均具有較強的抗性，此外，抗菌肽CEC-38具備抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的能力。
　　a.抗菌肽CEC-38對革蘭氏陰性及陽性細菌均有高效廣譜的殺傷作用，國內(nèi)外同類產(chǎn)品已報道至少有113種以上的不同細菌被抗菌肽所殺。
　　b.抗菌肽CEC-38對病毒的殺傷作用：抗菌肽通過阻遏病毒的基因表達來抑制和殺滅病毒。
　　c.抗菌肽CEC-38對原蟲的殺滅作用：抗菌肽對多種原蟲均有殺傷作用。
　　2.CEC-38抗菌肽殺菌機理
　　CEC-38抗菌肽功能從目前的研究結(jié)果來看，其殺菌機理主要是作用于細菌的細胞壁，破壞其完整性并產(chǎn)生穿孔現(xiàn)象，造成細胞內(nèi)容物溢出胞外而死亡。CEC-38抗菌肽首先由靜電吸引而附于細菌膜表面，疏水性的C端插入膜內(nèi)疏水區(qū)并改變膜的構(gòu)象，多個抗菌肽在膜上形成離子通道而導致某些離子的溢出而死亡。其次CEC-38抗菌肽作用于膜蛋白引起凝聚、失活及離子通道，引起膜滲透性改變而導致死亡，這是因為CEC-38抗菌肽存在特異性的膜受體及與其它細胞因子具有協(xié)同作用。
　　CEC-38抗菌肽對革蘭氏陰性及陽性細菌均有高效廣譜的殺傷作用。研究表明至少有113種以上的不同細菌均能被CEC-38抗菌肽所殺滅。
　　CEC-38抗菌肽對正常哺乳動物細胞及昆蟲細胞無不良影響，但對癌細胞則有明顯殺傷作用。這種選擇性機理可能與細胞骨架有關(guān)。
　　CEC-38抗菌肽具有弱堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點。CEC-38抗菌肽對真菌效果一般，但對原蟲、病毒及癌細胞等均具有強有力的殺傷作用。
　　3.CEC-38抗病毒機理
　　抗菌肽通過多種機制發(fā)揮抗病毒作用：
　　a.抗菌肽直接與病毒粒子結(jié)合，從而阻止病毒粒子與宿主細胞的融合達到抗病毒效果。
　　b.抗菌肽通過阻遏基因的表達來抑制病毒的增值。
　　c.抗菌肽可模仿病毒的侵染過程，干擾病毒的組裝而抑制或殺死病毒。
　　4.CEC-38抗菌肽的安全性與穩(wěn)定性
　　（1）安全性：是一種安全無毒副作用、無藥物殘留、無耐藥性、無污染的抗菌肽。
　?。?）穩(wěn)定性：呈弱堿性，非常穩(wěn)定。可耐受100℃高溫制粒，穩(wěn)定通過胃酸和膽鹽，抗胃蛋白酶和胰蛋白酶消化。
　　抗菌肽CEC-38對致病菌細胞膜具有穿孔作用，導致其細胞液溢出體外死亡。而對于正常動物細胞卻不具有穿孔作用，這是因為正常動物的細胞膜內(nèi)含有膽固醇，從而保護了細胞膜抵抗抗菌肽α螺旋的穿孔作用。
　　抗菌肽CEC-38是一種對動物安全無毒副作用的抗菌肽，而且不存在細菌的耐藥性，不會出現(xiàn)耐藥基因以及耐藥的傳遞作用。
　　抗菌肽CEC-38對人體是一種具有抑制病菌和病毒、腫瘤細胞和寄生蟲作用的肽類物質(zhì)，因此不存在藥物殘留和食品的問題。
　　和頭孢類抗生素、青霉素、鏈霉素、林可霉素等抗生素相比，抗菌肽CEC-38對腸道正常菌群的抑制作用較小，特別是乳酸菌和雙歧桿菌，幾乎沒有抑制作用。這是因為抗菌肽CEC-38是由乳酸菌分泌的抗菌肽，因此對于乳酸菌屬（包括雙歧桿菌）不具有抑殺作用。所以抗菌肽可以安全的應用于動物腸道。

5. CEC-38抗菌肽殺菌譜

致病菌	殺菌率（%）
大腸桿菌	98.7
鴨巴氏桿菌	85.0
豬副嗜血桿菌	94.3
產(chǎn)氣桿菌	75.2
金黃色葡萄球菌	87.2
沙門氏菌	88.3
鏈球菌	92.1
綠膿桿菌	93.2
肺炎克雷伯桿菌	86.3
肺炎鏈球菌	92.7
梭狀芽孢桿菌	83.2

　　殺菌率（%）=[（對照管細菌數(shù)量-試驗管細菌數(shù)量）/對照管細菌數(shù)量]×100
　?。?）廣譜抗菌性：抗菌肽CEC-38具有廣譜的抗革蘭氏陽性菌（G+）、革蘭氏陰性菌（G-）活性，而且還能抗病毒、腫瘤、寄生蟲、真菌。（2）選擇性毒性：由于細胞膜的組成和結(jié)構(gòu)以及抗菌肽CEC-38的作用機理不一樣，其對正常哺乳類動物細胞和腸道優(yōu)勢菌群沒有任何毒性，但對病原菌、病毒、腫瘤細胞和原蟲細胞具有選擇性毒性。（3）高效性：抗菌肽CEC-38的抑菌作用與微生物的種類、抗菌濃度有關(guān)。一般抗菌肽CEC-38在很低的濃度下即可抑制病原微生物生長，其最低抑菌濃度為4-8單位效價/ml。（4）穩(wěn)定性：抗菌肽CEC-38經(jīng)100℃處理30min后仍可保留大部分活性。（5）快速殺菌能力：體外試驗證明，抗菌肽CEC-38在50單位效價/ml范圍內(nèi)，5min即能殺死99.7%的微生物。

6. CEC-38抗菌肽抗病毒圖譜

禽病毒譜	豬病毒譜	牛病毒譜
高致病性禽流感病毒	豬細小病毒	牛冠狀病毒
雞新城疫病毒	豬偽狂犬病毒	牛瘟病毒
雞傳染性法氏囊病病毒	豬流行性腹瀉病毒	牛細小病毒
雞減蛋綜合癥病毒	豬藍耳病毒	?？谔阋卟《?/div>
雞傳染性喉氣管炎病毒	豬圓環(huán)病毒	牛輪狀病毒
傳染性支氣管炎病毒	豬口蹄疫病毒	牛病毒性腹瀉病毒
禽呼腸孤病毒	豬傳染性腦脊髓炎病毒	牛副流行性感冒病毒
傳染性鼻炎病毒	豬瘟病毒	牛傳染性鼻氣管炎病毒
禽痘病毒	豬流行性感冒病毒	牛流行熱病毒
鴨病毒性肝炎病毒	豬輪狀病毒	牛呼吸道合胞體病毒
鴨細小病毒	豬水泡病病毒
鴨瘟病毒
鴨副粘病毒

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