【筆記】偽狂犬病病毒變異株的致病性、分子特征分析及基因缺失疫苗的研制

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偽狂犬病病毒變異株的致病性、分子特征分析及基因缺失疫苗的研制

仇華吉  研究員

　　豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病毒引起的豬的急性傳染病。從2011年開(kāi)始我國(guó)豬群偽狂犬病重新流行，最早從華北地區(qū)開(kāi)始，隨后從北到南，迅速席卷全國(guó)，母豬以流產(chǎn)、死胎為主，仔豬神經(jīng)癥狀、高死亡率為主，直到現(xiàn)在仍沒(méi)有得到很好的控制。

發(fā)現(xiàn)偽狂犬新毒株——TJ株

　　2012年，在天津某大型豬場(chǎng)分離到一株病毒，經(jīng)鑒別診斷，確定是不同于經(jīng)典株的偽狂犬毒株，命名為T(mén)J株。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明PRV TJ株在小鼠和豬只上的致病性增強(qiáng)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)滴鼻接種死亡率高于肌肉注射途徑。感染日齡越早，死亡率越高。

　　對(duì)PRV TJ株進(jìn)行全基因組測(cè)序，TJ株與SC株相比，在494位有一個(gè)氨基酸的插入；在194、54位各有一個(gè)氨基酸的替換；與早期毒株相比，TJ株與近期分離毒株均有特異性變化，這些變化可能與致病力增強(qiáng)有關(guān)。

　　通過(guò)基因工程技術(shù)手段構(gòu)建出rPRV TJ-del gE/gl/TK三基因缺失偽狂犬毒株，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明構(gòu)建的三基因缺失病毒rPRV TJ-delgE/gl/TK具有很好的免疫原性和安全性，對(duì)小鼠、綿羊、和仔豬更為安全，較低劑量即能保護(hù)仔豬抵抗致死性PRV變異株的攻擊。

通過(guò)研究，得出以下結(jié)論：
　　1、Bartha-K61株疫苗不能對(duì)PRV變異株（TJ株）提供完全的保護(hù)。
　　2、與經(jīng)典株SC株相比，變異株（TJ株）對(duì)小鼠和豬致病性明顯增強(qiáng)。
　　3、全基因組序列分析顯示，TJ株多個(gè)病毒蛋白出現(xiàn)了特征性變異。
　　4、構(gòu)建的雙基因缺失病毒rPRV TJ-del gE/gl，對(duì)仔豬安全且能對(duì)PRV變異株的攻擊提供完全保護(hù)。
　　5、構(gòu)建的三基因缺失病毒rPRV TJ-del gE/gl/TK，對(duì)小鼠、綿羊、和仔豬更為安全，能保護(hù)仔豬抵抗致死性PRV變異株的攻擊。

　　仇華吉研究員針對(duì)目前偽狂犬流行現(xiàn)狀提出了防控建議：加強(qiáng)抗體檢測(cè)，一旦發(fā)現(xiàn)gE抗體陽(yáng)性，要對(duì)疑似偽狂犬病的感染豬進(jìn)行病原檢測(cè)；堅(jiān)決淘汰gE抗體陽(yáng)性公豬；對(duì)于gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)，除了50-60日齡仔豬免疫外，還要增加新生仔豬的噴鼻免疫，使用gE抗體陰性后備母豬逐步替換母豬群；后備母豬配種前補(bǔ)免一次疫苗；Bartha-K61疫苗對(duì)變異株也有保護(hù)但是需要種豬群每年至少免疫2-4次；要從gE抗體陰性的豬場(chǎng)引進(jìn)種豬。

　　目前流行的偽狂犬病以母豬流產(chǎn)和仔豬神經(jīng)癥狀及死亡為兩大癥狀。偽狂犬流行具有新的變化：一是感染后潛伏期更長(zhǎng)；二是保育豬，甚至中大豬的臨床癥狀更加典型嚴(yán)重；三是種豬終生帶毒，造成繁殖障礙和垂直傳播；四是疫苗免疫效果下降。多個(gè)研究機(jī)構(gòu)的研究表明目前分離到的PRV流行毒株同源性相近，但是與經(jīng)典毒株有一些差異，但同時(shí)也不要過(guò)分夸大變異株偽狂犬的危害，偽狂犬疫苗免疫保護(hù)力與豬群管理和健康狀態(tài)有很大關(guān)系，廣大養(yǎng)殖戶合理科學(xué)做好偽狂犬的防控，一方面要建立切實(shí)有效的生物安全屏障，尤其是引種環(huán)節(jié)，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)種豬群的檢測(cè)，剔除偽狂犬野毒陽(yáng)性豬只。另一方面要選擇合理的免疫方案，增加免疫次數(shù)，并制定長(zhǎng)期的凈化方案，才能從根本上解決問(wèn)題。新南方臍帶血檢測(cè)可以通過(guò)檢測(cè)母豬偽狂犬病毒垂直傳播，評(píng)估母豬偽狂犬疫苗免疫效果，通過(guò)測(cè)序分析豬場(chǎng)偽狂犬病毒基因類型，豬場(chǎng)可以利用臍帶血檢測(cè)，為豬場(chǎng)偽狂犬防控提供打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。