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海藻糖對植酸酶熱穩(wěn)定性的影響研究

apple12151007 2011-1-24 14:36

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簡介

海藻糖（Trehalose）又名繭蜜糖、蘑菇糖、漏蘆糖或簟糖，是在動物、植物、微生物中廣泛分布的一種低聚糖，當(dāng)生物處于逆境時，其含量增加，是一種典型的應(yīng)激代謝產(chǎn)物。

　　海藻糖（Trehalose）又名繭蜜糖、蘑菇糖、漏蘆糖或簟糖，是在動物、植物、微生物中廣泛分布的一種低聚糖，當(dāng)生物處于逆境時，其含量增加，是一種典型的應(yīng)激代謝產(chǎn)物。海藻糖由兩分子的吡喃葡萄糖單體以α－1，1－糖苷鍵連接而成，其化學(xué)名為α－D－吡喃葡萄糖基-α-D－吡喃葡萄糖苷，分子式為C12H12O11，相對分子量為378.33（含兩分子結(jié)晶水），熔點(diǎn)為97 ℃，加熱會失去結(jié)晶水。由于其分子結(jié)構(gòu)對稱，無半縮醛基，所以既無還原性，也無變旋光性。海藻糖除了具有低聚糖的一般特性（低熱值、抗齲齒性、非消化性、有膳食纖維的作用、有利于雙歧桿菌的增殖）外，還有其獨(dú)特的物理化學(xué)特性，甜度為蔗糖的45％；耐熱耐酸，是二糖中最穩(wěn)定的。既使與氨基酸、蛋白質(zhì)等混合加熱也不會發(fā)生美拉德反應(yīng)，一般的酶不能將其水解。海藻糖具有很好的防腐性，對逆境具有高抗性，許多含海藻糖的動植物完全干燥后仍維持其活性，一旦遇水后，立即復(fù)活。海藻糖的生物保護(hù)機(jī)制一般認(rèn)為是其生物保護(hù)機(jī)構(gòu)能強(qiáng)力地束縛水分子，與脂膜質(zhì)共同擁有結(jié)合水或海藻糖本身起到代替膜結(jié)合水的作用，從而防止蛋白膜的變性。由于其具有抗逆、抗寒、抗旱、耐高溫、吸水、低甜度、保濕、生物保護(hù)等特點(diǎn)，使得他在食品、保健品、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)業(yè)等方面有很大的應(yīng)用前景，已成為近年來研究的熱點(diǎn)。

　　植酸酶是一種能水解植酸的酶類,具有很多生理功能,飼料中添加植酸酶,可以提高磷的利用率,保護(hù)環(huán)境,植酸酶在畜禽養(yǎng)殖上的應(yīng)用已基本得到肯定。目前植酸酶雖然廣泛應(yīng)用,但在制粒過程中酶活的喪失或下降始終是制約它應(yīng)用的一個問題,在制粒高溫(75~95 ℃)過程中,植酸酶的活性將會大幅降低。目前已對生物提取的植酸酶進(jìn)行了包被,加入了一些化學(xué)物質(zhì),提高了其高溫條件下的穩(wěn)定性,其中海藻糖已經(jīng)被作為一種包被成分在商品植酸酶中使用,本試驗選用海藻糖和商品植酸酶為材料來研究海藻糖對商品植酸酶的耐高溫的影響。

　　1　材料與方法1.1　主要設(shè)備儀器恒溫水浴鍋：（37±0.1） ℃；分光光度計(有10 mm比色皿，可在415 nm下測定吸光度)；EMS－9A型磁力攪拌器；PHS－3C型酸度計（可精確至小數(shù)點(diǎn)后兩位）；電爐子、電子秤、移液管、移液槍(1、5 ml)、試管（5、10、20 ml）、燒杯（5、10 ml）、量筒、溫度計（1~100 ℃）等。

　　1.2　主要試劑及配制方法商品用植酸酶(黃褐色小顆粒,活性為5 000 U/g);植酸鈉、海藻糖均購自北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司。

　　乙酸緩沖液：稱取30 g三水合乙酸鈉和0.126 g無水氯化鈣，溶解在約500 ml蒸餾水中，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.5，定容至1 000 ml，保存期1周。

　　植酸鈉溶液(7.5 mmol/l)：稱取0.693 g肌醇六磷酸鈉(Sigma公司生產(chǎn))于100 ml容量瓶中,用乙酸緩沖液溶解并定容至刻度，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　硝酸溶液：量取100 ml濃度為65%的濃硝酸與200 ml蒸餾水混合。

　　鉬酸銨試劑：稱取100 g鉬酸銨(天津市化學(xué)試劑四廠生產(chǎn)),溶解在800 ml蒸餾水，再加入10 ml 25%的氨水，定容至1 000 ml，儲存于暗處。

　　釩酸銨試劑：稱取0.235 g釩酸銨，溶解在70 ml水中，預(yù)熱至55 ℃，加入2 ml稀硝酸，定容至100 ml儲存于暗處。避光條件下保存1周有效。

　　顏色終止液：移取2份硝酸溶液、1份鉬酸銨溶液，1份釩酸銨溶液混合后使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　基準(zhǔn)物（磷酸二氫鉀，購自天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠），各種常用玻璃器皿（需不含磷）。

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