海藻糖對植酸酶熱穩(wěn)定性的影響研究

　　1.3.1　酶樣試劑的準(zhǔn)備精確稱取1 g植酸酶(精確到0.001 g)、1 g植酸酶＋40 mg海藻糖、1 g植酸酶＋60 mg海藻糖、1 g植酸酶＋80 mg海藻糖，置于100 ml容量瓶中,加入約70 ml pH值為5.5的乙酸緩沖液，在磁力攪拌器上高速攪拌30 min，制成懸浮液。將此懸浮液靜置0.5 h，直至上清液完全析出后取上清液待用。每個樣品做1個平行樣，逐級稀釋測定酶活性。

　　1.3.2　酶樣試劑的稀釋（逐步稀釋）酶液用醋酸緩沖液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,控制吸光度 OD值在0.1～0.6,確保試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度。

　　取上清液1 ml于1號試管中,加入醋酸緩沖液4 ml,搖勻;取1號液1 ml于2號試管中,加入醋酸緩沖液3 ml,搖勻;取2號液1 ml于試管中,加入醋酸緩沖液2 ml,搖勻。(待反應(yīng)液)具體稀釋步驟如下（見表1）。

　　1.3.3　反應(yīng)步驟每組取4支試管(樣品和樣品空白各設(shè)1個平行,取其平均值)分別加入1.8 ml醋酸緩沖液,再各加0.2 ml待反應(yīng)液。搖勻，37 ℃預(yù)熱5 min。樣品中加4 ml底物，樣品空白中加4 ml終止液，搖勻。37 ℃水浴反應(yīng)30 min（樣品空白可以不反應(yīng)）后，樣品中加4 ml終止液，空白中加4 ml底物，搖勻，靜置后在415 nm下測定吸光度OD415。具體反應(yīng)步驟見表2。

　　1.4酶活力測定

　　1.4.1　測定方法采用絕對法（仲裁法）。

　　1.4.2　酶活力單位定義酶活力單位定義：37 ℃，pH值為5.5條件下，每分鐘水解植酸鈉溶液釋放1 μmol無機(jī)磷的酶量為1個酶活單位?；钚在d高，單位時間內(nèi)水解植酸、植酸鹽的量就越多。


　　1.4.3　待測酶液的制備精確稱取兩份1 g的植酸酶(精確到0.001 g)、1 g的植酸酶＋40 mg海藻糖、1 g的植酸酶＋60 mg海藻糖、1 g的植酸酶＋80 mg海藻糖，置于100 ml容量瓶中，加入約70 ml pH值為5.5的乙酸緩沖液，在磁力攪拌器上高速攪拌30 min，制成懸浮液。

　　1.4.4　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取0.680 4 g在105 ℃烘至恒重的基準(zhǔn)物磷酸二氫鉀于100 ml容量瓶中,用乙酸緩沖液溶解,并定容至100 ml,濃度為50.0 mmol/l,再按表3中的比例稀釋成不同濃度,按表2中的步驟與試樣一起反應(yīng)并測定,以無機(jī)磷濃度為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),列出直線回歸方程(y=ax+b)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)見表3和圖1。